Analyse transcriptionnelle des phases précoces de l'infection par le baculovirus AcMNPV et exploitation d'une banque d'ADN complémentaire issue de sa cellule-hôte, Sf9 - Agropolis Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2002

Transcriptional study of the early steps of the AcMNPV baculovirus infection and analysis of a cDNA library belonging to its host-cell, Sf9

Analyse transcriptionnelle des phases précoces de l'infection par le baculovirus AcMNPV et exploitation d'une banque d'ADN complémentaire issue de sa cellule-hôte, Sf9

Résumé

S. frugiperda (Lepidoptera) is both a major pest of cultivated plants and the source of the Sf9 cell line, widely used for the production of recombinant proteins in the baculovirus expression system. In the first part of this work, we studied the transcriptional events occuring during the early steps of the viral infection. We first show that homologous regions (hrs) of the AcMNPV baculovirus contain a large number of binding sites for AP1/CREB transcription factors, that specifically bind proteins of the Sf9 host cell. Furthermore, in the infected context these sites are required for the transactivation mediated by the immediate-early viral factor IE1, that also binds hr sequences. This study shows for the first time the involvement of cellular factors in this mechanism of viral transactivation. However, this work has been impaired by the fact that little is known about the genes expressed in the Sf9 cell line. We thus decided to construct a cDNA library, that was used for different purposes: screening of the library using a probe previously identified in the lab allowed us to obtain the complete hsp90 gene sequence and to determine its main features. Besides this work, large-scale sequencing of the library led to the construction of an EST library, from which we identified almost all the ribosomal protein genes. Sequence analysis revealed several features that seemed to be restricted to insect or lepidoptera species, an unexpected result given the large conservation of these genes througout the evolution.
Le lépidoptère Spodoptera frugiperda est un ravageur important des cultures mais aussi l'organisme source de la lignée cellulaire Sf9, utilisée pour la production de protéines recombinantes dans le système d'expression baculovirus/cellule d'insecte. Dans la première partie de ce travail, nous avons étudié la transcription chez le baculovirus AcMNPV aux temps précoces de l'infection. Nous montrons tout d'abord que les régions homologues (hrs) portées par le génome de ce virus contiennent de nombreux motifs de reconnaissance pour des facteurs de transcription de type AP1/CREB, et que ces sites fixent spécifiquement des protéines de la cellule-hôte, Sf9. Par ailleurs, dans le contexte de l'infection, ces sites sont nécessaires à la transactivation médiée par le facteur viral très précoce IE1 qui se fixe lui aussi sur les hrs. Cette étude montre pour la première fois l'implication de facteurs cellulaires dans ce mécanisme de transactivation virale. La progression de ces travaux a cependant été freinée par le peu de données disponibles sur les gènes exprimés par Sf9. Pour en faciliter l'accès, nous avons donc construit une banque d'ADNc, dont l'exploitation fait l'objet de la deuxième partie de ce mémoire. Son criblage a permis d'obtenir la séquence complète de l'ADN complémentaire du gène hsp90 chez S. frugiperda, et d'en déterminer les principales caractéristiques. Par ailleurs, le séquençage à grande échelle de la banque a conduit à la constitution d'une banque d'ESTs, permettant l'identification de la quasi-totalité des gènes de protéines ribosomales. L'analyse de leur séquence a révélé l'existence de particularités qui semblent restreintes aux insectes et aux lépidoptères, un résultat inattendu compte tenu de la grande conservation de ces gènes entre espèces.
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Dates et versions

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  • HAL Id : tel-00472671 , version 1
  • PRODINRA : 248186

Citer

Igor Landais. Analyse transcriptionnelle des phases précoces de l'infection par le baculovirus AcMNPV et exploitation d'une banque d'ADN complémentaire issue de sa cellule-hôte, Sf9. Biochimie [q-bio.BM]. Universite Montpellier II; Université Montpellier II - Sciences et Techniques du Languedoc, 2002. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00472671⟩
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